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氧化磷酸化系列/轉氫酶-1測試盒(微量法)

產品規(guī)格 : 100管/96樣

測試方法：微量法

產品分類：氧化磷酸化系列

產品品牌：mlBio/酶聯生物

產品包裝：液體盒裝

運輸條件：快遞包郵

應用范圍：僅供科研研究使用

保存條件：低溫避光保存

有效期：６個月

說明書 : 咨詢或電詢客服索取

供應商：上海酶聯生物科技有限公司

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

氧化磷酸化系列/轉氫酶-1測試盒(微量法)

測定意義：
TH位于線粒體的內膜上，又稱為呼吸電子傳遞鏈復合體六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉化。催化正向反應稱為TH-1。線粒體NADH含量增加時會導致線粒體膜的H+電化學梯度升高，因而促進了電子傳遞鏈上ROS的產生。TH-1促進NADH轉換為NADPH，從而提高線粒體的抗氧化能力。
測定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉氫反應不能導致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+）替代NADP+，TH-1催化 APADP+還原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通過測定375nm光吸收增加速率，來計算TH-1活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11100g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的TH-1（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入500uL試劑二，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于TH-1活性測定。