目錄:上海酶聯(lián)生物科技有限公司>>ELISA(生化測(cè)試盒)>>氧化磷酸化系列>> 100管/48樣氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測(cè)試盒/微量法
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更新時(shí)間:2022-08-10 19:04:17瀏覽次數(shù):628評(píng)價(jià)
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氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測(cè)試盒/微量法
產(chǎn)品規(guī)格 :100管/48樣
測(cè)試方法:微量法
產(chǎn)品分類(lèi):氧化磷酸化系列
產(chǎn)品品牌:mlBio/酶聯(lián)生物
產(chǎn)品包裝:液體盒裝
運(yùn)輸條件:快遞包郵
應(yīng)用范圍:僅供科研研究使用
保存條件:低溫避光保存
有效期:6個(gè)月
說(shuō)明書(shū) : 咨詢或電詢客服索取
供應(yīng)商:上海酶聯(lián)生物科技有限公司
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測(cè)試盒/微量法
測(cè)定意義:
線粒體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,由F1和F0兩個(gè)亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成,也可逆過(guò)程水解ATP。此外,復(fù)合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細(xì)菌中。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。
測(cè)定原理:
復(fù)合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi,通過(guò)測(cè)定Pi增加速率來(lái)測(cè)定復(fù)合體Ⅴ活性。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g,4℃離心5min。
③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅴ(此步可選做)。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體,加入800uL試劑二和8uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體Ⅴ酶活性測(cè)定。
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