移動(dòng)端
直播推薦
回放
回放
企業(yè)動(dòng)態(tài)
- 五相5月生化實(shí)驗(yàn)儀器生產(chǎn)商產(chǎn)品優(yōu)惠中
- 佳施加德士采購(gòu)華測(cè)儀器Huace-300表面體積電阻率測(cè)試儀設(shè)備一臺(tái)
- 遼寧鼎際得石化股份有限公司采購(gòu)佳航的全自動(dòng)密度計(jì)Digipol-D70
- 上海五相2025年五一放假時(shí)間安排
- 江蘇力德儀表有限公司關(guān)于2025五一假期通知
- 應(yīng)對(duì)貿(mào)易戰(zhàn)：自主傳感器替代及非美國(guó)進(jìn)口品牌推薦
- 江蘇鑫源生化科技發(fā)展有限公司佳航的全自動(dòng)電位滴定儀JH-T6
- 2025年云境天合舉行便攜式el檢測(cè)儀介紹會(huì)
推薦展會(huì)
速率區(qū)帶離心法 |你的分離純化方法選對(duì)了嗎？
密度梯度離心（isodensity centrifugation method）又稱(chēng)為區(qū)帶離心。
該方法的優(yōu)點(diǎn)是可以同時(shí)使樣品中幾種或全部組分分離，具有良好的分辨率，分離效果好，可一次獲得較純組分。
缺點(diǎn)是離心時(shí)間較長(zhǎng)，需制備梯度液，操作要求高。
按照離心分離原理，密度梯度離心又可分為速率區(qū)帶離心法(rate zonal centrifugation method，R-Z)和等密度離心法 (isopycnic centrifugation method)。
速率區(qū)帶離心也可稱(chēng)為等區(qū)密度離心，是根據(jù)樣品中不同組分粒子所具有的不同的體積大小和不同的沉降系數(shù)將混合樣品進(jìn)行離心分離提純。
離心時(shí)將需要分離的樣品溶液置于由密度梯度材料(如蔗糖、氯化銫 (CsCI)、溴化鈉等)形成的梯度液柱上面，樣品粒子的密度必須大于梯度液柱中任一點(diǎn)的密度，否則無(wú)法得到理想的區(qū)帶離心效果。離心時(shí)，混合樣品中不同的組分將在梯度液柱的不同位置分別形成各自的區(qū)帶，選擇適合的轉(zhuǎn)速和時(shí)間進(jìn)行離心，當(dāng)各組分區(qū)帶距離拉得遠(yuǎn)時(shí)，結(jié)束離心，然后將區(qū)帶取出。這樣只需通過(guò)一次離心就可以把混合樣品中的各組分分離提純，其純度和回收率均可滿足要求。
優(yōu)點(diǎn)是一次分離純化，組分的沉降系數(shù)相差 20% 以上的即可選用此法，分辨力高，操作熟練可以將組分沉降系數(shù)相差 5%～10% 的樣品很好的分離。
缺點(diǎn)是材料的條件限制，樣品液濃度不能太高，否則操作條件很難控制，同時(shí)此法與差速離心法相比，處理樣品的量要小的多。
圖 1 速率區(qū)帶離心
速率區(qū)帶離心的時(shí)間必須嚴(yán)格控制，不能太短，否則樣品區(qū)帶不清，時(shí)間也不能太長(zhǎng)，否則待分離組分可能沉底。需要分離的樣品顆粒的沉降速度取決于顆粒形狀、大小、密度及離心力等因素。離心前后樣品的狀態(tài)如圖 1 所示。
速率區(qū)帶離心經(jīng)典的應(yīng)用就是通過(guò)蔗糖密度梯度離心，進(jìn)行各種亞細(xì)胞器(核糖體、線粒體、Exosome 等)和病毒顆粒(病毒載體、疫苗等)的純化。例如，我們?cè)谏弦黄谥械玫降?70S 核糖體沉淀，經(jīng)過(guò)水解后，可利用蔗糖密度梯度離心，進(jìn)一步分離純化得到 50S 和 30S 的兩個(gè)亞基。具體的實(shí)驗(yàn)流程如下：
離心課堂正在連載，持續(xù)關(guān)注了解更多離心方法！
關(guān)注往期離心課堂
□
□
□
□
□
□
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
浙公網(wǎng)安備 33010602002722號(hào)
第四屆全國(guó)光譜大會(huì)
展會(huì)城市：株洲市展會(huì)時(shí)間：2025-05-08