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DNA合成儀的合成原理及過程

   2019年06月19日 14:41  
   【儀器網(wǎng) 產(chǎn)品文庫】DNA合成儀設(shè)計用于合成結(jié)構(gòu)上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動化儀器。一般應(yīng)用于固相合成法,每次將一個核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上,加入每一個核苷酸都利用相同的化學(xué)反應(yīng)與相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。所用化學(xué)反應(yīng)和操作細節(jié)隨不同的儀器而改變,廣泛應(yīng)用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法。
 
  合成原理:
 
  DNA的固相合成:即DNA3\'端固定于基質(zhì)上,然后沿3\'向5\'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應(yīng)用DNA聚合酶的DNA合成。
 
  合成過程:
 
  di一個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
 
  1.1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,
 
  2.然后用dian氧化成磷酸三酯
 
  3.加入二lv乙酸除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
 
  循環(huán)進行加入下一個堿基合成完畢后
 
  1.用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT
 
  2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫
 
  3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑
 
  4.除去氫氧化銨,真空抽干
 
  5.液相色譜或者PAGE,回收片段長的。

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