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DNA合成儀的合成原理及過程

   2019年06月19日 14:41  
   【儀器網(wǎng) 產(chǎn)品文庫】DNA合成儀設(shè)計用于合成結(jié)構(gòu)上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動化儀器。一般應用于固相合成法,每次將一個核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上,加入每一個核苷酸都利用相同的化學反應與相應的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。所用化學反應和操作細節(jié)隨不同的儀器而改變,廣泛應用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法。
 
  合成原理:
 
  DNA的固相合成:即DNA3\'端固定于基質(zhì)上,然后沿3\'向5\'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。
 
  合成過程:
 
  di一個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
 
  1.1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,
 
  2.然后用dian氧化成磷酸三酯
 
  3.加入二lv乙酸除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
 
  循環(huán)進行加入下一個堿基合成完畢后
 
  1.用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT
 
  2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫
 
  3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑
 
  4.除去氫氧化銨,真空抽干
 
  5.液相色譜或者PAGE,回收片段長的。

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