脈沖場凝膠電泳是近年發(fā)展起來的分離效果較好的DNA分離方法,可以有效分離50kb甚至10Mb的DNA大片段。因此脈沖電泳儀已經成為DNA分離的主要儀器。脈沖電泳儀的使用條件對DNA分離速度與效果有很大影響,主要包括以下幾點:
1.電泳緩沖液
在脈沖電泳時常使用的電泳緩沖液有三種,不同緩沖液的離子強度不同,電泳速度也不同。
2.瓊脂糖種類及濃度
瓊脂糖種類對脈沖場電泳雖然影響不是甚大,但也有一定程度影響。低電滲(EEO)的瓊脂糖使電泳速度加快。有條件的情況下,使用超純瓊脂糖可產生較好的分離效果。凝膠的濃度太低,使泳動速度加快,不利于較小或中等長度DNA片段的分離。膠的濃度太大,則影響大分子DNA的分離。因此要根據具體情況,選用不同濃度的膠。在一-般情況下,常采用的凝膠濃度為1~1.4%。
3.電壓
6~10伏特/cm的電壓梯度常可使幾十kb到1000kb的DNA片段得到有效分離。如果想分離更長的DNA片段,則應適當降低電壓梯度。
4.變換電場方向的時間間隔
開關(即變換電場方向)的時間間隔對電泳效果影響較大。DNA在泳動過程中再定向所需的時間和DNA的大小呈正相關,因此較大的DNA分子需要較長的開關時間間隔。在確定了開關時間間隔的情況下,小于一定尺寸的DNA分子能夠隨著電場方向的變化再定向并在新電場影響下泳動,而大于一定尺寸的DNA分子在再定向尚未完成時便發(fā)生了開關的再次變化,因此不能泳動和得到有效分離。
5.溫度
電泳時通過循環(huán)裝置使緩沖液保持恒定是重要的。溫度的高低對電泳速度也有重要影響。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
第四屆全國光譜大會
展會城市:株洲市展會時間:2025-05-08