細(xì)胞名稱人胸腺激酶缺陷細(xì)胞；143BTK-
形態(tài)特性上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性143B細(xì)胞是一株人的胸腺激酶缺陷細(xì)胞系，由WistarInstitute制備，為美國(guó)專，利細(xì)胞系，僅可作為研究用，不能用于商業(yè)目的。
培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況C97
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)陰性
STRSTR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限A類
參考文獻(xiàn)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基（含NaHCO31.5g/L；GIBCO,貨號(hào)12800017，添加NaHCO31.5g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；L-glutamine(推薦gibco貨號(hào)：35050-061)，2mM；雙抗，1%；（可在*培養(yǎng)基中加入最，大耐藥濃度18ug/ml的GEM)
2）細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時(shí)較為脆弱，中止液須為不含GEM的*培養(yǎng)基，且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含GEM的*培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)再根據(jù)需要濃度添加GEM。
3）若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢時(shí)，可適當(dāng)降低GEM的濃度，或使用不含GEM的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的GEM濃度。
4）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
