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紫外分光光度計(jì)的用法及使用過程

來源: 德國耶拿分析儀器股份公司北京代表處    2020年11月05日 14:38  
  紫外分光光度計(jì)的用法及使用過程
 
  紫外分光光度計(jì)是根據(jù)樣品的濃度和吸光度是成正比關(guān)系的,濃度越大,吸收值越高,也就是瑯伯-比爾定律的原理研發(fā)的測(cè)試物質(zhì)含量以及定性的實(shí)驗(yàn)室常用儀器。它的應(yīng)用領(lǐng)域涉及制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個(gè)方面,用來進(jìn)行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等。
 
  所以紫外分光光度計(jì)用的較多的還是定量分析,定量分析的種類有很多,這里介紹常用的幾種定量分析方法:
 
  1、法:法是紫外可見分光光度計(jì)諸多分析方法中使用多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎(chǔ)的分析方法,某一物質(zhì)在一定波長(zhǎng)下ε值是一個(gè)常數(shù),石英比色皿的光程是已知的,也是一個(gè)常數(shù)。因此,可用紫外可見分光光度計(jì)在λmax波長(zhǎng)處,測(cè)定樣品溶液的吸光度值A(chǔ)。然后,根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb,則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
 
  2、標(biāo)準(zhǔn)法:在選定的波長(zhǎng)處,在相同的測(cè)試條件下,分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液C標(biāo)和被測(cè)試樣品溶液C樣的吸光度A標(biāo)和A樣。然后,按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
 
  C樣=A樣/A標(biāo)×C標(biāo)
 
  3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
 
  紫外可見分光光度計(jì)常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液,再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長(zhǎng)下,測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測(cè)得吸光度值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對(duì)應(yīng)的濃度或含量。
 
  4、 其它分析方法
 
  除上述幾個(gè)分析方法外經(jīng)常使用的分析方法外,還有比吸收系數(shù)法、Z小二乘法、解聯(lián)立方程法和示差分光光度法。
 
  (2) 定性分析
 
  如果未知物的紫外吸收光譜的z大吸收峰波長(zhǎng)λmax、z小吸收峰波長(zhǎng)λmin、z大摩爾吸光系數(shù)εmax,以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)光譜數(shù)據(jù)*一致,就可以認(rèn)為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。
 
  定量分析和定性分析是分光光度計(jì)的兩大主要功能,特別是定量分析。其它的分析都應(yīng)該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。

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