在反相色譜中,甲醇和乙的二種有機試劑,由于二者性質(zhì)的差異,在使用中有一定的區(qū)別。
1價格,乙腈高于甲醇
在分析成本上,HPLC級的乙腈,價格比HPLC級的甲醇高的多。因此,一般的液相色譜分析有機試劑甲醇為多。但文獻(xiàn)所示的條件多用乙腈。
2吸光度,乙腈低于甲醇
所謂的HPLC級是指除去具有吸收UV的物質(zhì),其在規(guī)定的吸收波長上的吸光度小于規(guī)格值,但并不是指的純度高。
從這四種試劑的吸收光譜看,HPLC級的乙腈吸收小,尤其在低波長上。因此在UV檢測時,其產(chǎn)生的噪音小,在低波長尤其明顯。所以在UV的低波長上,高靈敏度檢測用HPLC的乙腈合適。另外,在UV的梯度檢測上,HPLC的乙腈產(chǎn)生的鬼峰少,同時由于其低的吸收值,梯度變化其吸收值變化小,較大范圍內(nèi)的反相有機試劑梯度用HPLC乙腈適宜。
甲醇的HPLC級和優(yōu)級的吸收光譜相差不大,但優(yōu)級不能保證吸光度,因此還是盡量使用HPLC級。
3壓力,乙腈低于甲醇
色譜柱內(nèi)的壓力,同很多因素有關(guān),包括長度、內(nèi)徑、顆粒大小、填料性質(zhì)、流速、溫度及流動相等。但在實際分析過程中,影響壓力變化主要是流動相中有機溶劑和緩沖液混合比例的不同,圖中表示了水/乙腈,水/甲醇混合液的比例與壓力的關(guān)系。從圖中可以看到,甲醇與水混合壓力增高,而乙腈同樣與水混合并不如此,乙腈明顯優(yōu)于甲醇。同時我們也看到溫度對壓力的影響,溫度升高,壓力下降。
4流動相脫氣,乙腈要注意
這里只討論預(yù)先混合的流動相配置問題。甲醇與水混合時會發(fā)熱,溫度升高,多余溶解的空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?,容易脫氣。而乙腈與水混合是吸熱反應(yīng),隨著溫度慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣。
5洗脫強度,一般而言,乙腈大于甲醇
乙腈和甲醇與水混合二者比例相同,一般情況下,乙腈的洗脫能力強,尤其是混合比例低時。例如從和*的洗脫看,相同的保留時間,乙腈的比率只需甲醇的一半都不到,而另一方面,當(dāng)有機溶劑100%或與此非常接近時,對于胡蘿卜素和膽甾醇來看,甲醇的洗脫能力往往比乙腈強。
6分離選擇性,有差異
乙腈和甲醇在分離的選擇性上有一定的差異,尤其是極性或離子化合物,出峰次序往往會不一致。在圖4中,*和苯甲酸的洗脫次序改變。這是由于有機溶劑的化學(xué)性質(zhì)不同所致(甲醇是質(zhì)子性,乙腈是非質(zhì)子性)。因此,當(dāng)用乙腈(甲醇)不能獲得良好分離時可以試試甲醇(乙腈)。
7峰形,有時出現(xiàn)差異
對于像水楊酸化合物等,用乙腈時脫尾大,用甲醇則可抑制脫尾。這是由于對于硅表面與目標(biāo)成分有相互作用的流動相的有關(guān)方,因有機溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)不同而異,或者是對成分溶解能力的差異所造成的。
可是,一般情況下,聚合物反相柱在使用甲醇時比硅膠柱更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙稀柱分析芳香族化合物時常見,而用乙腈則效果好的多。
8結(jié)論
總之,對于反相色譜中常用的乙腈和甲醇,一般情況下使用HPLC乙腈效果,但用乙腈達(dá)不到效果時,可以試試HPLC級甲醇。
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