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【儀器網(wǎng) 行業(yè)應用】疏水色譜是一款通過利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動相洗脫時，各組分遷移速度不同而達到分離的目的的分析檢測儀器。一般疏水色譜采用鹽水溶液作為流動相，具有對蛋白質(zhì)的回收率高、蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)點。由于流動相中不使用有機溶劑，因此能夠保證蛋白質(zhì)固有的活性，是目前較常使用的蛋白質(zhì)分析檢測設備。
因為疏水色譜的主要分離對象為蛋白質(zhì)，而通常疏水作用色譜固定相的非極性比較弱，因此流動相多采用高濃度鹽緩沖液進行梯度洗脫。并且，疏水色譜使用時的分離條件較為溫和，可以避免反相色譜中由于固定相較強的疏水性和有機流動相引起蛋白質(zhì)的不可逆吸附和變性，因此特別適用于活性物質(zhì)的分離與純化。
常見疏水色譜的固定相表面為弱疏水性基團，它的疏水性比反相色譜用的固定相低很多，而流動相為高離子濃度的鹽溶液。蛋白質(zhì)分子在這樣的固定相和流動相中進行分配，蛋白質(zhì)分子上的疏水性基團和固定相的疏水基團作用而被保留。當用流動相洗脫時逐漸降低流動相的離子強度，洗脫能力增強。利用被分離組分分子表面的疏水微區(qū)、變性后暴露出的疏水殘基，或在高鹽環(huán)境下暴露于分子表面的疏水殘基與固定相的疏水性，配體之間的作用強弱，依次用從高至低離子強度洗脫液可將疏水作用由弱到強的組分分離開。
蛋白質(zhì)分子按其疏水性大小被依次洗脫出來，一般是疏水性較小的蛋白質(zhì)分子先流出。在這樣的高鹽水溶液中，蛋白質(zhì)不會失活。高濃度鹽與水分子發(fā)生強烈作用，導致疏水分子周圍形成空穴的水分子減少，疏水性分子與介質(zhì)的疏水配基之間發(fā)生結(jié)合。這種疏水作用的大小取決于固定相和溶質(zhì)的極性、流動相的組成和濃度。由于各種蛋白質(zhì)表面氨基酸殘基極性不同，因此有可能通過改變固定相的極性和流動相的組成從而實現(xiàn)分離蛋白質(zhì)的目的。
由于資料有限，因而上述內(nèi)容并不全面，歡迎補充。
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