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液相色譜柱的維護(hù)保養(yǎng)

   2018年01月12日 14:15  
  【中國儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。
 
  而液相色譜zui重要的就是它的色譜柱。液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
 
  在日常分離分析工作中,色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,色譜柱使用是否得當(dāng),直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。
 
  (1)在裝卸、更換色譜柱時(shí),動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動,以免柱床產(chǎn)生空隙。如果儀器用來做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱,這樣有助于延長柱子的壽命。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
 
  (2)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75mL。色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。在完成分離分析工作之后,不應(yīng)立即停機(jī),需及時(shí)對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,一般0.5h以上,以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
 
  (3)因?yàn)橐合嗌V柱是消耗品,隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,當(dāng)出現(xiàn)色譜峰高陣低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時(shí),一般來說可能是柱效下降。反相柱的再生,采用以甲醇:水=95: 5(V/V),純甲醇,二氯甲烷等溶劑作流動相,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為2030倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序,不要顛倒每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大,沖洗過程中請隨時(shí)注意調(diào)整沖洗的流速),用甲醇沖洗完后,再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。離子交換柱的再生。長時(shí)間在高pH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗,可使陽離子柱再生;反之,用稀堿緩沖溶液沖洗,可使陰離子柱再生。以上色譜柱的再生方法并不是的標(biāo)準(zhǔn)方法,使用者可根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)和目的,選擇合適的并能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑作流動相,按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是,無論采用什么方法再生色譜柱,均不可能*隊(duì)復(fù)柱效或其他參數(shù)至新柱水平。

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