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淺談PCR基因擴(kuò)增儀

   2016年05月20日 14:52  
   PCR基因擴(kuò)增儀
  
  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),簡稱PCR。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
  
  產(chǎn)品用途:
  
  PCR基因擴(kuò)增儀適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction , PCR)為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原體檢測及基因分析。
  
  產(chǎn)品特點:
  
  優(yōu)化的溫控模式,升降溫速度快,溫控,熱效率高,儀器壽命更長。
  
  一機(jī)多用:兼容0.2ml,0.5ml管,96標(biāo)準(zhǔn)微孔板。
  
  無油熱蓋調(diào)節(jié)方便,*防止蒸發(fā)。
  
  儀器操作簡便,人機(jī)界面友好。
  
  體積小,重量輕,節(jié)省實驗室空間。
  
  工作原理:
  
  PCR基因擴(kuò)增儀的工作原理: PCR反應(yīng)一般設(shè)置20~40次循環(huán),每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板。PCR的擴(kuò)增效率很高,如果循環(huán)次數(shù)是30次,那么新生DNA片段理論上達(dá)到230拷貝(約為109個分子)。 PCR反應(yīng)每個循環(huán)的三個基本反應(yīng)步驟如下:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA產(chǎn)物解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;③引物的延伸:溫度升到72℃左右,DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需 2~4分鐘,2~3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。到達(dá)平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。 PCR技術(shù)的特異性取決于引物與模板結(jié)合的特異性。 PCR儀也叫基因擴(kuò)增儀,它是利用PCR技術(shù)對特定基因做體外的大量合成,用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。
  
  實驗原理:
  
  PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),可以選擇性擴(kuò)增一段DNA序列。其基本步驟是,首先將待擴(kuò)增的模板DNA變性使之成為單鏈,DNA樣品中,特異性的引物能夠與其互補(bǔ)的序列雜交,在dNTPs和Taq酶存在時,就可以合成模板 DNA的互補(bǔ)鏈,反應(yīng)完成后,將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性,溫度下降后,過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸—變性—退火—延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次,使所需要的DNA片段得到特異性的擴(kuò)增。

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