高速逆流色譜(high-speed countercurrent chromatography,簡稱HSCCC) 是基于樣品在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的互不混溶的兩相溶劑間分配不同而獲得分離,因而無須固體載體或支撐體,能達(dá)到在短時間內(nèi)實現(xiàn)分離和制備,并且可以達(dá)到幾千個理論塔板數(shù)。
1.高速逆流色譜儀原理及特點
HSCCC利用了一種特殊的流體動力學(xué)(單向流體動力學(xué)平衡)現(xiàn)象。具體表現(xiàn)為一根100多米長的螺旋空管,注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相,然后作行星運動;同時不斷注入另一相(流動相),由于行星運動產(chǎn)生的離心力場使得固定相保留在螺旋管內(nèi),流動相則不斷穿透固定相;這樣兩相溶劑在螺旋管中實現(xiàn)的接觸、混合、分配和傳遞。由于樣品中各組分在兩相中的分配比不同,因而能使樣品中各組分得到分離。
2.HSCCC的優(yōu)點
2.1 應(yīng)用范圍廣,適應(yīng)性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無限多的,因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離,所以在分離天然化合物方面具有其獨到之處。并因不需固體載體,而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象,特別適用于分離極性物質(zhì)和其它具有生物活性的物質(zhì)。
2.2 操作簡便,容易掌握。分離過程中對樣品的前處理要求低,僅需一般的粗提物即可進(jìn)行HSCCC的制備分離或分析。
2.3 回收率高。由于沒有固體載體,不存在吸附、降解和污染,理論上樣品的回收率可達(dá)100%。在實驗中只要調(diào)整好分離條件,一般都有很高的回收率。
2.4 重現(xiàn)性好。如果樣品不具有較強的表面活性作用,酸堿性也不強,那么多次進(jìn)樣,其分離過程穩(wěn)定性都保持很好、峰的保留相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也小于2%,重現(xiàn)性相當(dāng)好。
2.5 分離效率高,分離量較大。由于其與一般色譜的分離方式不同,能實現(xiàn)梯度操作和反相操作、亦能進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣,使其特別適用于制備性分離,產(chǎn)品純度高。研究結(jié)果表明:一臺普通的高速逆流色譜儀一次進(jìn)樣可達(dá)幾十毫升,一次可分離近10g的樣品。因此,在80年代后期被廣泛地應(yīng)用于植物化學(xué)成分的分離制備研究。
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