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一、分光光度法測定物質(zhì)含量時應(yīng)注意的事項:

1、是顯色反應(yīng)的條件

2、是測量吸光度的條件。顯色反應(yīng)的條件有：顯色劑的用量 、顯色時間、干擾物質(zhì)的消除方法、介質(zhì)的酸度、顯色時溶液的溫度等。測量吸光度的條件包括應(yīng)選擇的入射光波長，吸光度范圍和參比溶液等。

紫外分光光度計法測定微量鐵的顯色劑可以選擇鄰二氮菲(phen)在pH=2～9的條件下，Fe2+離子與鄰二氮菲生成穩(wěn)定的橘紅色絡(luò)合物，反應(yīng)如下：

此絡(luò)合物lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)。

顯色前，要用鹽酸羥胺把Fe3+離子還原為Fe2+離子：

 測定時應(yīng)控制溶液酸度在pH=5左右為宜，酸度太高，反應(yīng)進行較慢，酸度太低，Fe2+離子水解，影響顯色。

二、試劑和儀器

儀器：UV-1500PC（上海美析儀器有限公司）

試劑 ：1、100鐵標(biāo)準溶液

 2. 10鐵標(biāo)準溶液由100稀釋制得

3.鹽酸羥胺10%溶液   

4.鄰二氮菲溶液0.15%  

5.NaAc溶液1mol/L

三、 實驗步驟

1、測量波長的選擇

在50ml容量瓶中按次序準確加入以下溶液，10鐵標(biāo)準溶液5ml，10%鹽酸羥胺1ml，搖勻，再加入1mol/LNaAc溶液5ml，0.15%鄰二氮菲3ml。用水稀釋至刻度。在分光光度計上，用1cm比色皿以水為參比溶液，測定其在440～580nm之間的吸光度。并繪制圖，從曲線上找出大吸收的波長。

2、顯色劑用量的選擇

  取7個50ml容量瓶，各加入1ml10鐵標(biāo)準溶液，1ml鹽酸羥胺，搖勻。再分別加入0.10、0.30、0.50、0.80、1.0、2.0、4.0ml鄰二氮菲和5mlNaAc溶液，以水稀釋至刻度，搖勻，放置10min。以水為參比溶液，在選擇的波長下測定各溶液的吸光度。并繪制,從曲線上找出顯色及的適宜用量V。

3、顯色時間的選擇

  在1個50ml容量瓶中，加入1ml10鐵標(biāo)準溶液，1ml鹽酸羥胺，再加入由上述選擇的適宜鄰二氮菲Vml，5mlNaAc，以水稀釋至刻度，搖勻。立刻用比色皿以水為參比在選擇的波長下測量吸光度。然后依次測定放置5、10、30、60min后的吸光度。繪制圖，選出與鄰二氮菲顯色反應(yīng)所需的適宜時間。

4.標(biāo)準曲線的繪制

  在6個50ml容量瓶中，分別加入0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml 10鐵標(biāo)準溶液，再分別加入1ml鹽酸羥胺，2ml鄰二氮菲，5mlNaAc溶液，用水稀釋至刻度，搖勻。以水為參比溶液在選擇的波長 、選擇的適宜顯色劑用量、適宜顯色時間下測定各溶液的吸光度。繪制標(biāo)準曲線圖。

數(shù)據(jù)記錄與處理 

1.測量波長的選擇

由上圖知，適宜波長為=510nm

2.顯色劑用量的選擇

顯色劑體積V/mL

由上圖知，適宜指示劑用量為V=1.0ml

3.顯色時間的選擇

由上述圖知，直線斜率K=1.0×10-4≈0，故可認為顯色時間對吸光度幾乎無影響。

4.標(biāo)準曲線的繪制

鐵標(biāo)準溶液體積v/mL

五、關(guān)于我們

上海美析儀器有限公司(以下簡稱美析)，是一家具有自主知識產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測試儀器領(lǐng)域，不斷開發(fā)出先進的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。

      美析主營光譜類儀器可見分光光度計、紫外可見分光光度計、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計、原子熒光光度計、ICP電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目前，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機化學(xué)、無機化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。同時美析利用在產(chǎn)品機械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗，結(jié)合市場的最新實際需求，近期將陸續(xù)推出一批全新的分析類儀器。 

美析的總部及生產(chǎn)基地設(shè)在上海，營銷中心設(shè)在北京，并在江蘇、上海、山東三地建有研發(fā)基地。為充分利用各地的智力資源，美析與國內(nèi)外的部分科研單位也進行了深層次的科研合作，不斷將科研成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力。為更好的服務(wù)于廣大客戶，美析儀器國內(nèi)設(shè)有12家辦事機構(gòu)，度身定制符合您需求的應(yīng)用解決方案，提高產(chǎn)品的附加值。在不斷服務(wù)國內(nèi)用戶的同時，美析也與20多個國家的分銷機構(gòu)建立了深度的戰(zhàn)略合作關(guān)系。