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一招教會你如何使用分光光度計

來源: 南京信帆生物技術(shù)有限公司    2020年11月26日 23:17  
  一招教會你如何使用分光光度計
 
  使用分光光度計的步驟與方法
 
  1.預(yù)熱儀器:
 
  為使測定穩(wěn)定,將電源開關(guān)打開,使儀器預(yù)熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
 
  2.選定波長:
 
  根據(jù)實驗要求,轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
 
  3.固定靈敏度檔:
 
  根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2~0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
 
  4.調(diào)節(jié)“0”點:
 
  輕輕旋動調(diào)“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時,比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
 
  5.調(diào)節(jié)T=100%:
 
  將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第1格內(nèi),有色溶液放在其它格內(nèi),把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器,使透光度T=100%,即,表頭指針恰好指在T=100%處。
 
  6.測定:
 
  輕輕拉動比色皿座架拉桿,使有色溶液進(jìn)入光路,此時表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華,讀數(shù)后,打開比色皿暗箱蓋。
 
  7.關(guān)機:
 
  實驗完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
 
  分光光度計的檢驗小妙招
 
  1.波長準(zhǔn)確度的檢驗:
 
  分光光度計在使用過程中,由于機械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因,經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象,因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗。
 
  檢驗波長準(zhǔn)確度簡-單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定,則需要進(jìn)行波長調(diào)節(jié)。
 
  2.透射比正確度的檢驗:
 
  用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長處,以空氣為參比,分別測量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處,以高氯酸溶液為參比,測量其透射比。
 
  3.穩(wěn)定度的檢驗:
 
  在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。
 
  4.光的檢驗:
 
  可見分光計棱鏡式儀器在420nm處,光柵式儀器在360nm處,紫外分光計在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片,以空氣為參比,測量其透射比值,即為儀器在相應(yīng)波長下的雜散輻射率。
 
  分光光度計的維護(hù)和保養(yǎng)
 
  分光光度計是精密儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準(zhǔn)確度有重要作用。
 
  1.對儀器工作環(huán)境的要求
 
  分光光度計應(yīng)安裝在穩(wěn)定的工作臺上,(周圍不應(yīng)有強磁場, 以防電磁干擾),室內(nèi)溫度應(yīng)保持在(10~30)℃。室內(nèi)應(yīng)干燥,相對濕度宜控制在<85 %,室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性氣體,光線不宜過強。
 
  2.儀器保養(yǎng)和維護(hù)方法
 
  (1)儀器工作電壓一般為220V,允許±10 %的電壓波動。為保持光源燈和檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性,在電源電壓波動較大的實驗室配備穩(wěn)壓器。
 
  (2)為了延長光源使用壽命,在不用時不用開光源燈。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附,若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
 
  (3)單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換干燥劑。
 
  (4)必須正確使用吸收池,保護(hù)吸收池光學(xué)面。
 
  (5)光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
 
  使用分光光度計都有什么注意事項?
 
  1)為了防止光電管疲勞:
 
  不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷,以延長光電管使用壽命。
 
  2)比色皿的使用方法:
 
 ?、倌帽壬髸r:
 
  手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,不要碰比色皿的透光面,以免沾污。
 
 ?、谇逑幢壬髸r:
 
  一般先用水沖洗,再用蒸餾水洗凈。如,比色皿被有機物沾污,可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1:2)浸泡片刻,再用水沖洗。不能用堿溶液或氧化性強的洗滌液洗比色皿,以免損壞。也不能用毛刷清洗比色皿,以免損傷它的透光面。每次做完實驗時,應(yīng)立即洗凈比色皿。
 
 ?、郾壬笸獗诘乃貌羚R紙或細(xì)軟的吸水紙吸干:
 
  以保護(hù)透光面。
 
  ④測定有色溶液吸光度時:
 
  一定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次,以免改變有色溶液的濃度。另外,在測定一系列溶液的吸光度時,通常都按由稀到濃的順序測定,以減小測量誤差。
 
 ?、菰趯嶋H分析工作中:
 
  通常根據(jù)溶液濃度的不同,選用液槽厚度不同的比色皿,使溶液的吸光度控制在0.2~0.7。
 

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