D-蟲熒光素鉀鹽 常用溶液
D-蟲熒光素鉀鹽 常用溶液
D-蟲熒光素(D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)??膳c小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)活體熒光檢測(cè)。
應(yīng)用:
(1) 體外分析
(2) 活體成像分析
(3) 高靈敏度ATP分析
使用方法:
1. 活體成像分析方法
(1) 用DPBS(w/o Mg2+ 、Ca2+ )配置D-Luciferin工作液(15mg/mL)* ,0.2 μm濾膜無(wú)菌過(guò)濾。
(2) 注射量:10μL/g的體重,如10g 重小鼠,注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。
(3) 腹腔注射10~15分鐘后,上機(jī)進(jìn)行圖像分析。
2. 體外分析方法
(1) 用無(wú)菌水配置200× 的D-Luciferin儲(chǔ)備液(30mg/mL)*,立即使用,或-20℃保存。
(2) 用預(yù)熱好的完丨全培養(yǎng)基1∶200稀釋D-Luciferin儲(chǔ)備液,配置工作液(150μg/mL)。
(3) 去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。
(4) 進(jìn)行圖像分析前,向細(xì)胞中添加1× 的D-Luciferin工作液,進(jìn)行圖像分析**。
(5):溶解D-Luciferin時(shí)要完丨全。
(6):在圖像分析前,將細(xì)胞進(jìn)行37℃的短時(shí)間培養(yǎng)可以增加信號(hào)強(qiáng)度。
相關(guān)產(chǎn)品:
D-蟲熒光素游離酸(D-Luciferin, free acid)、D-蟲熒光素鉀鹽(D-Luciferin, potassium salt)和D-蟲熒光素丨鈉鹽(D-Luciferin, sodium salt),鉀鹽、鈉鹽的形式是通用的,因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是活體動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。