細胞名稱U251（人膠質(zhì)瘤細胞）
種屬人
年齡（性別）
組織來源
生長特性貼壁
細胞形態(tài)成纖維細胞樣
背景描述U251細胞源自一位患者的膠質(zhì)母細胞瘤組織。
生長培養(yǎng)基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S
培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
驗收細胞注意事項
1、收到人淋巴T細胞系Kit225，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。
2、收到人淋巴T細胞系Kit225，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。
3、收到人淋巴T細胞系Kit225后，請鏡下觀察細胞，用恰當(dāng)方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。
4、收到人淋巴T細胞系Kit225時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。
6、24小時后，人淋巴T細胞系Kit225形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml0.25%含EDTA的胰，酶消化，消化時間以具體細胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
