上海甲基化檢測實驗外包
DNA甲基化是Z早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。

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上海甲基化檢測實驗外包服務項目 

1、甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為*，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。

2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為*，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR，在擴增過程中*全部轉化為胸腺嘧啶，后對PCR產物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產物克隆至載體后進行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法。

3、甲基化敏感擴增多態(tài)性(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)

MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進行酶切和連接。由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點，即CCGG位點。當DNA序列中的CCGG位點出現(xiàn)不同程度的甲基化狀態(tài)時，會分別被這兩種酶識別，以有無產物的方式體現(xiàn)出來。

4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)

通過準確定量單個連續(xù)的CpG 位點上的甲基化頻率，焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細微改變。在序列延伸過程中，根據(jù)C和T的摻入量來定量確定單個位點的C-T比例。因此，不同位點的甲基化變異就能被準確檢測。由于焦磷酸測序提供了真實的序列數(shù)據(jù)，甲基化狀態(tài)也就以序列形式呈現(xiàn)。

送樣要求

細胞(≥106個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料，基因組DNA(體積≥20μl，濃度≥50 ng/μl)。