轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒炌獍?br>轉(zhuǎn)錄組是連接基因組遺傳信息與生物功能的蛋白質(zhì)組的必然紐帶，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是目前研究zui多的，也是生物體zui重要的調(diào)控方式。

一、轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒炌獍?/strong>產(chǎn)品介紹

轉(zhuǎn)錄組測序(Transcriptome sequencing)是通過二代測序平臺快速全面地獲得某一物種特定細胞或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有的轉(zhuǎn)錄本及基因序列，可以用于研究基因表達量、基因功能、結(jié)構(gòu)、可變剪接和新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測等。目前，轉(zhuǎn)錄組測序已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。上海劍鈍生物利用標準化的實驗流程、*的測序平臺和專業(yè)的信息分析，以高效率、高質(zhì)量的科技服務(wù)贏得業(yè)內(nèi)專業(yè)人士的良好口碑。

二，轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒炌獍?/strong>操作流程

1. 全轉(zhuǎn)錄組總RNA提?。?/span>

2. mRNA分離和文庫構(gòu)建；

3. 高通量測序；

4. 數(shù)據(jù)處理與生物信息學(xué)分析；

5. 測序報告生成

三、轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒炌獍?/strong>生物信息分析

(一)無參考基因組序列的轉(zhuǎn)錄組

1. 標準信息分析

1) 對原始數(shù)據(jù)進行去除接頭序列及低質(zhì)量reads的處理；

2) 數(shù)據(jù)產(chǎn)出統(tǒng)計及測序數(shù)據(jù)的成分和質(zhì)量評估；

3) 進行基因表達定量分析

4) 組裝結(jié)果分析；

5) Unigene功能注釋及COG分析；GO分類；pathway分析；NR分析；Swissprot分析

6) Unigene表達差異分析；

7) 差異基因的表達模式聚類分析

8) 差異表達基因的GO功能富集分析和Pathway富集性分析；

9) 差異表達基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析；

10) SNP分析

2. 高級分析

轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析，及網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建和重要TF分析；

通路交互網(wǎng)絡(luò)分析，重要通路分析。

差異表達基因共表達分析，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖

轉(zhuǎn)錄因子活性分析，預(yù)測zui重要的轉(zhuǎn)錄因子；

基因共上游調(diào)控元件預(yù)測

miRNA預(yù)測，預(yù)測調(diào)控靶基因的重要miRNA

主成分分析

(二)有參考基因組序列的轉(zhuǎn)錄組

1. 標準信息分析

1) 對原始數(shù)據(jù)進行去除接頭污染序列及低質(zhì)量 reads 的處理

2) 參考基因組比對

3) 進行基因表達定量分析

4) 可變剪切分析（真核）

5) 新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測：新mRNA和新lncRNA預(yù)測

6) 差異表達基因分析（2個或者2個以上的樣本）

7) 差異基因的表達模式聚類分析

8) 差異基因的GO功能富集分析和KEGG PATHWAY富集分析

9) 差異基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析

10) SNP分析

2. 高級分析

lncRNA-mRNA表達關(guān)聯(lián)性分析，及網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建；

轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析，及網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建和重要TF分析；

通路交互網(wǎng)絡(luò)分析，重要通路分析。

差異表達基因共表達分析，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖

轉(zhuǎn)錄因子活性分析，預(yù)測zui重要的轉(zhuǎn)錄因子；

基因共上游調(diào)控元件預(yù)測

miRNA預(yù)測，預(yù)測調(diào)控靶基因的重要miRNA

主成分分析

藥物小分子預(yù)測分析（適用于人類），得到zui相關(guān)的藥物小分子。

四、樣品要求

1）樣品類型：細胞、新鮮組織或RNA樣品。

2）樣品的量：細胞樣品請?zhí)峁┲辽?×107個細胞，組織樣品請?zhí)峁┲辽?00mg的組織塊或切片，RNA樣品請?zhí)峁?0 μg以上的總RNA。

3）樣品質(zhì)量：RNA無明顯降解，提取的總RNA OD260/280值在1.8~2.2之間，濃度 ≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 8。

4）樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊（切成~50mg的小塊）可用TRIZOL或RNA保護劑處理或液氮凍存后，-80℃保存。RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復(fù)凍融。

5）樣品運輸：樣品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰運輸。