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蛋白組學(xué)服務(wù)

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蛋白組學(xué)服務(wù)蛋白質(zhì)組學(xué)的核心內(nèi)容之一就是蛋白質(zhì)鑒定。傳統(tǒng)的方法如蛋白質(zhì)微量測序、氨基酸組成分析(如Edman 降解法)費時費力、通量極低,不容易實現(xiàn)規(guī)模化和自動化,結(jié)果靈敏度差等。當(dāng)前主流的基于軟電離技術(shù)的液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)(LC-MS/MS)是實現(xiàn)高通量蛋白鑒定的主要方法。

蛋白組學(xué)服務(wù)iTRAQ的4種同位素標(biāo)記試劑由4種相對分子質(zhì)量分別為114、115、116和117的報告基團(reportergroup),相對分子質(zhì)量分別為31、30、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(balancegroup)以及一個相同的肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(peptide reactivegroup)組成。不同的報告基團分別與相應(yīng)的平衡基團相配后,相對分子質(zhì)量均為145,即等量異位標(biāo)簽(isobaric tag)。
將蛋白質(zhì)裂解為肽段,然后用iTRAQ試劑進(jìn)行差異標(biāo)記。由于iTRAQ試劑是等量的,即不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在*級質(zhì)譜檢測,分子量*相同,用串聯(lián)質(zhì)譜方法對在*級質(zhì)譜檢測到前體離子(precursorion)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離,產(chǎn)物離子通過第二級質(zhì)譜進(jìn)行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中,報告基團、質(zhì)量平衡基團和多肽反應(yīng)基團之間的鍵斷裂,質(zhì)量平衡基團丟失,產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報告離子。由于二級質(zhì)譜可分析相對分子質(zhì)量相差1的報告基團,不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標(biāo)記的多肽的相對豐度。同時,多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂,形成一系列b離子和y 離子,得到離子片段的質(zhì)量數(shù),通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較,可以鑒定出相應(yīng)的蛋白質(zhì)前體.

蛋白組學(xué)服務(wù)技術(shù)特點:
1.可同時標(biāo)記2~8 個樣本。
2. iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白,還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標(biāo)記修飾后的氨基酸,因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質(zhì)量較低(113~121),低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準(zhǔn)確的區(qū)域,因此質(zhì)譜檢測更為靈敏可靠。


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