德國Lavision Biotec
---雙光子熒光顯微鏡TriM Scope

      在強(qiáng)光激發(fā)下，分子同時吸收兩個光子，從基態(tài)躍遷到兩倍光子能量的激發(fā)態(tài)的過程。兩個光子可以是相同波長的，也可以是不同波長的，但必須是同時吸收（兩個光子到達(dá)被激發(fā)分子的時間間隔小于1飛秒）?？梢赃@樣理解，先吸收一個光子的能量躍遷到一個虛擬的中間態(tài)，然后再吸收一個光子的能量躍遷到激發(fā)態(tài)。

     雙光子顯微鏡相對于共聚焦等其他顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)：

• 光損傷?。河捎陔p光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，這一波段的光對活體細(xì)胞和組織的光損傷小，適用于長時間的研究；

穿透能力強(qiáng)：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力，因而受生物組織散射的影響更小，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；研究表明，共聚焦熒光成像的成像深度一般在50微米左右，而雙光子顯微鏡的成像深度可達(dá)1000微米；

高分辨率：由于雙光子吸收截面很小，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光，雙光子吸收僅局限于焦點(diǎn)處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)； 

      北京大學(xué)謝曉亮教授（北大長江講座教授；哈佛講席教授，美國*院士）在美國哈佛大學(xué)使用LaVision BioTec的雙光子顯微鏡之后，在北京大學(xué)建立北京生物動態(tài)光學(xué)成像中心之時，又再度引進(jìn)雙光子顯微鏡，并且給予顯微鏡該高度評價。
        LaVision BioTec于2000在德國成立，作為一家專業(yè)的雙光子顯微鏡和OPO振蕩器、雙光子分光器等設(shè)備生產(chǎn)商，LaVision BioTec在短短的10年內(nèi)已經(jīng)成功的為歐美等國家諸多大學(xué)和研究所提供了超過110套雙光子顯微鏡設(shè)備和10多套片掃描（全面掃描）熒光顯微鏡，成為該領(lǐng)域質(zhì)量的供應(yīng)商。

• *的多光束快速掃描模式：用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec*的多光束快速掃描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式選擇。多光束平行掃描技術(shù)是指入射光經(jīng)過分光器，分解為64束光，同時進(jìn)入顯微鏡，通過物鏡聚焦在樣品上，通過XY掃描器利用這64束光同時進(jìn)行掃描，并調(diào)整Z軸進(jìn)行三維成像，保證zui低的樣品損傷的同時*地提高了掃描速度。
• *個可用軟件調(diào)節(jié)的雙光子顯微鏡：ImSpector Pro軟件支持了*的掃描模式，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想*工具。
• 同類產(chǎn)品中具有*的檢測效率：TriM Scop可以支持zui多達(dá)8個 non-descanned PMT, NDD可以是cooled generation III GaAsP PMT或者APD detector可以多傳輸40%效率的量子，比同類產(chǎn)品具備更佳的檢測效率。
• 世界上*能夠支持OPO技術(shù)的顯微鏡：OPO技術(shù)– 紅光和蛋白的激發(fā)：經(jīng)典的Ti:Sa激光器成像紅光的能力是非常有限的，因?yàn)榻?jīng)典的激發(fā)波長是1125到1250 nm, 并不在Ti:Sa激光器的轉(zhuǎn)換范圍之類。OPO技術(shù)解決了這個問題，因?yàn)樗軅鬏斂烧{(diào)的fs激光脈沖到>1100 nm的范圍。

     *代雙光子顯微鏡：LaVision BioTec革新的技術(shù)提供了*的雙光子顯微鏡-TriM Scope I：

用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式：從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec的多光束快速掃描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式選擇?？焖賿呙枘Ｊ郊纯杀ＷCzui大可允許64束光同時掃描，并且保證zui低的樣品損傷，主要有下面三個原因:

64束光能夠提供單光束的64倍熒光強(qiáng)度并且保證低損傷高熒光強(qiáng)度 

保證了高的幀速率

CCD攝像頭比PMTs更高靈敏度

TriM Scope 可以提供zui多達(dá)8個NDD攝像頭給經(jīng)典的單光束掃描顯微鏡，2個CCD攝像頭，1個TCSPC 探測器為FILM（Fluorescence Lifetime Imaging Microscope ）測量。3 個NDD可以安裝到靠近物鏡的位置，2個 NDD可以插入到傳送器。

LaVision BioTec的ImSpector Pro軟件支持了*的掃描模式，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想*工具。

TriM Scope 還可以結(jié)合1個OPO使用，OPO可以轉(zhuǎn)換Ti:Sa激光器的波長從800-880 nm轉(zhuǎn)變到1100-1300 nm。因此紅光染料或者蛋白質(zhì)可以被有效地激發(fā)出雙光子，保證了很低的漂白率和zui深的穿透深度。LaVision BioTec可以同時使用Ti:Sa激光和OPO來掃描，就能同時激發(fā)出綠/黃和紅光。   

•    自動校準(zhǔn)的雙光子顯微鏡
•    穿透zui深的樣品深度，并能應(yīng)用OPO技術(shù)
•    可升級到LaVision BioTec的64束光分光技術(shù)
•    多用戶使用環(huán)境中的雙光子顯微鏡

TriM Scope II雙光子顯微鏡提供了第二代的雙光子顯微鏡，并且在各種使用環(huán)境下能夠完成快速、深度成像。基本配置是單光束掃描元件，包括正置機(jī)身和2個靠近物鏡的NDD檢測器。作為選件，該顯微鏡可以配置:

LaVision BioTec的光學(xué)分光器，用于64路光束的平行掃描

zui多可達(dá)到8個NDD檢測器

各種不同的CCD攝像頭

LaVision BioTec的快速TCSPS檢測器

用于共聚焦檢測的descanned檢測器

預(yù)啁啾補(bǔ)償器

OPO      

Cancer Cell Propagation

Imaging of Lymph Node

Imaging of Mouse Brain Slice