液相色譜儀是分析工作者常用的“一門武器”。本人工作15.5年，深感何時能將液相做到有“打游戲”感覺時，便是到了游刃有余、駕輕就熟的境界?，F(xiàn)今的液相軟件均已具備了強大的數(shù)據(jù)處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測定做到事半功倍、輕松自如。
一、水相中的溶質(zhì)溶解方式
水相中需溶解的無機鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團濃度”，其后一旦遇到某特殊情形(如遇有機溶劑、溫度劇降等)，極易析出少量結晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白fen”的現(xiàn)象。
二、流動相的配制與使用
1.恒度洗脫
一定是將水相與有機相混合后、抽濾(使用混合型過濾膜)，用一個管路(如A管)泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節(jié)約有機相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個管路(一個純水相、一個純有機相)泵入儀器，即便配制了脫氣機。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。
剩余流動相*可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗時與新配制的流動相混合后抽濾即可。無需擔心發(fā)霉、無機鹽析出、揮發(fā)、比例不準等問題，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實踐是檢驗真理的標準！實踐吧~
2.梯度洗脫
流動相配制為科學的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為低比例的水相-高比例的有機相(英國藥典幾乎均如此)；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為純有機相；不科學的為：A相為純水相、B相為純有機相，如既有質(zhì)量標準采用了此種方式，建議改為第二種或一種方式，否則基線漂移嚴重，難以進行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測。
梯度洗脫結束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開始下一針測定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關鍵。切勿短時間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會對儀器和色譜柱損傷較大。
三、液相色譜儀色譜柱的安裝
標準SOP應為：
取A管路放入流動相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0ml/min→安裝色譜柱，待20秒后，流動相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。
以上安裝順序遵循的是：
逐級排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗梯度洗脫連續(xù)一周，一針與后一針主成分保留時間相差在6秒以內(nèi)。
四、液相色譜儀試驗后色譜柱的清洗
1.常用的C8柱、C18柱
1.1流動相僅為乙腈-水或甲醇-水時
繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗時溫度，即可。
1.2水相中有無機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時
先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(試驗采用哪個管路，就要從頭到尾沖洗該管路)，時間30分鐘(如流動相中有表面活性劑，適當增加時間)，流速1.0ml/min，柱溫可較試驗溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關閉。結束后取下色譜柱放置陰涼處。
很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實屬畫蛇添足，導致殘余的有機相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年(倒著用測非有關物質(zhì))。
2.其他類型色譜柱
查詢獲取如何科學合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法，切勿盲動，否則導致色譜柱性能急劇下降。
