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SRM 968f血清的超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法分析

閱讀:821      發(fā)布時間:2022-6-10
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方法精密度

將低、中、高三個濃度SRM 968f血清標準品溶液 加入 4% BSA混合血清樣本經(jīng)本法處理后進行檢測, 每個濃度重復(fù)6次,連續(xù)檢測三天,計算日內(nèi)精密度 為 0.9% ~ 9.6% ,日間精密度為 3.0% ~ 9.3% (見表 3)。 該方法同時測定6種脂溶性.維生素的日內(nèi)精密 度和日間精密度均在 15% 以內(nèi),方法精密度滿足檢 測需求。

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方法準確度

將低、中、高濃度的SRM 968f血清標準品溶液加入混合血清樣本中按本法進行前處理后進行檢測,每 個濃度重復(fù)6次,計算加標回收率,3個水平的加標 回收率為86.6% ~ 107.7% ,相對標準偏差(RSD)為1.46% ~ 9.39% (見表 4)。 該方法加標回收率均在80% ~ 120% 以內(nèi),方法準確度高滿足檢測需求。

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方法驗證

采用建立的UPLC-MS / MS方法對 美國國家標準技術(shù)研究所(NIST)制定的標準參照品SRM 968f血清 進行檢測,每個水平重復(fù) 2 次取平均值,驗證方法準確度。 結(jié)果表明,除25-OH-VD2含量較 低未能檢出外,其它檢測結(jié)果與靶值偏差均在 5% 以內(nèi),該方法檢測結(jié)果準確可靠(表 5)。

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結(jié)論

研究建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時 測定微量血清樣本中多種脂溶性.維生素的方法,并對 前處理過程中的蛋白沉淀試劑、萃取液用量,復(fù)溶液 等進行了優(yōu)化,以減少色譜圖中噪音干擾,改善色譜 峰形,提高檢測靈敏度。 并比較了不同色譜柱對多種 脂溶性.維生素尤其是不同類型維生素.E 的分離效果, 最終選擇 Phenomenex Kinetex F5 色譜柱,該色譜柱可 以實現(xiàn) β - 生育酚和 γ - 生育酚的有效分離。 本研究 中只需 20 μl 血清就能夠快速完成 6 種脂溶性.維生素 的測定。 該方法測定樣本需求量少、操作簡單、檢測 結(jié)果準確快速可實現(xiàn)大量臨床樣本的同時檢測,尤其 對采血較為困難的嬰幼兒可以實現(xiàn)少量血液樣本檢 測多數(shù)項目的需求。


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