小鼠前列環(huán)素(PGI2)elisa檢測試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠前列環(huán)素(PGI2)水平。用純化的小鼠前列環(huán)素(PGI2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列環(huán)素(PGI2)，再與HRP標記的前列環(huán)素(PGI2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列環(huán)素(PGI2)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中小鼠前列環(huán)素(PGI2)濃度。
小鼠前列環(huán)素(PGI2)elisa檢測試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(200ng/L)0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
小鼠前列環(huán)素（PGI2）elisa檢測試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
100ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
50ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
25ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
12.5ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
6.25ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
小鼠前列環(huán)素（PGI2）elisa檢測試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照小鼠前列環(huán)素(PGI2)elisa檢測試劑盒說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
小鼠前列環(huán)素（PGI2）elisa檢測試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃。
2.有效期：6個月
