人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒使用說明書
 

　　本試劑盒僅供研究使用。
 

　　實驗原理
 

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平。用純化的人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)，再與HRP標(biāo)記的單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)濃度。
 

　　人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒組成
 

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
 

　　2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(480ng/L)0.5ml×1瓶
 

　　3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
 

　　4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
 

　　5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
 

　　6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
 

　　標(biāo)本要求
 

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
 

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒操作步驟
 

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
 

　　240ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　120ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　60ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　30ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　15ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
 

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
 

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
 

　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
 

　　7.溫育：操作同3。
 

　　8.洗滌：操作同5。
 

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
 

　　10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
 

　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 

　　計算
 

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
 

　　人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒注意事項
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 

　　2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
 

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
 

　　4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請避光保存。
 

　　7.嚴(yán)格按照人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
 

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。
 

　　人單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)elisa試劑盒保存條件及有效期
 

　　1.試劑盒保存：2-8℃。
 

　　2.有效期：6個月