蝦補體4(C4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
 

　　本試劑盒僅供研究使用。
 

　　檢測范圍：96T
 

　　0.2μg/ml -8μg/ml
 

　　使用目的：
 

　　本試劑盒用于測定蝦血清、血漿及相關(guān)液體樣本中補體4(C4)含量。
 

　　實驗原理
 

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中蝦補體4(C4)水平。用純化的蝦補體4(C4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入補體4(C4)，再與HRP標記的補體4(C4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的補體4(C4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中蝦補體4(C4)濃度。
 

　　試劑盒組成
 

　　標本要求
 

　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
 

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　蝦補體4(C4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
 

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
 

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
 

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
 

　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
 

　　7.溫育：操作同3。
 

　　8.洗滌：操作同5。
 

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
 

　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 

　　蝦補體4(C4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié)：
 

　　計算
 

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
 

　　蝦補體4(C4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 

　　2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
 

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
 

　　4.請每次測定的同時做標準曲線做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請避光保存。
 

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
 

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。
 

　　蝦補體4(C4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
 

　　1.試劑盒保存：2-8℃。
 

　　2.有效期：6個月