熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH），縮寫為FISH，就是魚的意思，以此類推，做熒光原位雜交也叫釣魚。

熒光原位雜交實驗 它的實驗原理也挺像釣魚的：它是用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而探針可以直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。你們看，像不像在茫茫大海里面釣魚呢？探針像不像魚鉤呢？

釣魚實驗的特點：操作煩瑣，步驟簡單。

說它操作煩瑣，是因為它的操作步驟巨多，每一步又需要相當長的時間，如果自己標探針的話每批標本大約三天時間（買試劑盒只需一天，但價格昂貴），你說是不是很煩瑣？說它步驟簡單則是因為FISH只要操作過程仔細，嚴格按照操作步驟操作，很容易做成功，比PCR要簡單得多。將繁瑣的簡單步驟做好也是有門道的。

探針設(shè)計，量身定制 探針就是魚鉤。魚鉤不管用，還能釣得上大魚嗎？設(shè)計探針要根據(jù)實驗的需要來進行，也就是說你要檢測的目的基因決定你的探針設(shè)計。這就像是一個老練的漁夫會根據(jù)不同的魚的種類來選擇魚鉤一樣。舉個例子，如果目的基因大概是1.8KB，可以直接對PCR產(chǎn)物進行*標記。也可以找技術(shù)服務(wù)公司幫你設(shè)計合成探針，每條探針設(shè)計合成大概3500。

組織切片和載玻片的選擇

組織切片4～5μm 厚，過厚或過薄的切片均會對信號的強弱產(chǎn)生影響，而且切片應(yīng)完整，質(zhì)量良好，否則會在預處理時掉片。載玻片的選擇建議使用防脫載玻片，有條件的實驗室可使用更好的陽離子或者陰離子載玻片，可有效防止脫片現(xiàn)象的發(fā)生。

注意標本預處理細節(jié)

標本的處理也是關(guān)系到后信號強弱的關(guān)鍵，但有些人不注意這些細節(jié)，結(jié)果造成熒光信號弱，難以分辨。這與預處理不當造成探針難以達到飽和而雜交難以進行有關(guān)。

變性要規(guī)范

這一步是FISH關(guān)鍵中的關(guān)鍵。變性包括標本變性和探針變性，這兩個步驟關(guān)系到FISH的成敗，千萬要嚴格按照操作規(guī)程進行，不但如此，特殊標本還要自己摸條件。試想變性不*，DNA的雙鏈都沒能*打開，雜交能順利進行嗎？

操作熒光抗體時要避光

操作熒光抗體的時候千萬要避光，否則將前功盡棄啊。舉個例子吧。魚竿，魚鉤，魚餌都備齊了，也不能保證一定就能釣到大魚兒。魚兒上鉤了之后，還有一個把魚拖上岸的終過程。在FISH，就是使用熒光顯微鏡觀察和記錄結(jié)果。在正常情況下，目前商業(yè)化的探針即使是雜交以后，熒光信號能保存半年之久。有時候，信號也會急劇衰減，幾分鐘后就不見了。就像魚兒一開始上鉤了，馬上又掙脫魚鉤，重返大海了。出現(xiàn)這種情況，就是由于沒有嚴格避光。因此在觀察和記錄的時候，要盡可能地在暗室里面操作。這和以前洗照片是一個原理哈。

當然，也有偷懶的招術(shù)。那就是：抗熒光淬滅劑（antifade），在封片觀察的時候加入，可以延緩熒光的淬滅。注意：如果一次沒有成功，可以將探針洗掉，再進行雜交。這又像極了釣魚。第yi次魚兒脫鉤了，我們可以換個魚鉤再釣，直到釣到大魚為止。

FISH其實做出來還是很漂亮很漂亮的。讓我們一起感受一下生物學的大美。